本发明涉及天然药物化学领域，具体涉及一种白藜芦醇二聚体(7R,8R)-trans-δ-viniferin（I），其制备方法及其降血糖的用途。本发明通过采用高速逆流色谱从白藜芦醇二聚体中分离得到其R型，药效学试验证明，R型白藜芦醇二聚体降血糖效果优于外消旋体。
1.结构式（I）的化合物或其药学上可接受的盐：xa0ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>。
2.一种药物组合物，其中包括权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。xa0
3.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐用于制备与高血糖相关的疾病的药物的用途。xa0
4.权利要求1的化合物的制备，包括：将正己烷：乙酸乙酯：水按4.8-5.2:4.8-5.2:9.8-10.2的体积比配制两相溶剂，上相为固定相，下相加入22-28mmol/L羟丙基-β-环糊精作为流动相，从头端往高速逆流色谱仪中泵入固定相，待管路充分充满固定相后转动主机，同时泵入流动相，待管路出口处有明显流动相流出时，将外消旋体溶于少量上相中注入样品池，同时开始采集数据，按峰接收目标成分，即得。xa0技术领域
本发明涉及天然药物化学领域，具体涉及一种白藜芦醇二聚体(7R,8R)-trans-δ-viniferin，其制备方法及其降血糖的用途。
背景技术
手性化合物尤其是手性药物对映体的分离，在药物研究和医药工业发展方面具有重要意义。含有手性中心的药物，其药理和毒理作用却存在着差异，往往一种立体异构体有药效而它的镜像分子却药效很小，甚至完全没有药效或具有副作用。手性拆分技术中高效液相色谱（HPLC）发挥着极其重要的作用，但价格昂贵，采用HPLC法进行制备性分离的溶剂消耗量也很大。高速逆流色谱是一种基于样品在两相互不相溶的溶剂之间分配系数不同而实现分离和制备的新技术。将逆流色谱应用于手性化合物的分离，不需要采用化学手段将手性试剂键合到固体介质上，而只需将合适的手性试剂添加到液态固定相或者流动相中即可。同一根逆流色谱分离柱可以反复多次的用于不同手性化合物的分离，只需选择合适的两相溶剂体系和手性试剂即可。同时，只要通过调节加入到固定相或流动相中的手性试剂的量，同一根逆流色谱柱既可用于手性分析，也可用于手性制备性分离。化合物trans-δ-viniferin（简称TVN）为白藜芦醇二聚体：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>是1977年从葡萄中分离得到的天然产物，在天然药物或中药中分离得到的此化合物都是以外消旋体的形式得到的。在实验室中利用苦瓜过氧化物酶对白藜芦醇进行生物转化，也可得到外消旋体的TVN。目前，对此化合物活性的报道仅限于较强的抗氧化作用，之前我们申请的专利（公开号：CNxa0101433534A），通过体外活性测试发现，TVN外消旋体对α-糖苷酶抑制能力为阿卡波糖的254倍。
发明内容
本发明公开了一种TVN的光学异构体，即结构式I的(7R,8R)-trans-δ-viniferin，简称(R,R)-TVN，结构式如下：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>本发明还公开了结构式I的(7R,8R)-trans-δ-viniferin的手性制备方法及其医药用途。通过对外消旋体TVN得手性高速逆流色谱（HSCCC）拆分得到(7R,8R)-trans-δ-viniferin（I，(R,R)-TVN）和(7S,8S)-trans-δ-viniferin（(S,S)-TVN）两种光学纯的化合物。ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>结构式I的化合物可用以下方法制备得到：利用苦瓜过氧化物酶对白藜芦醇进行生物转化，转化产物经硅胶柱色谱，用氯仿：甲醇作为洗脱剂冲洗，再经过制备HPLC，得到TVN外消旋体。TVN外消旋体经过高速逆流色谱，可得到(R,R)-TVN和(S,S)-TVN两种光学纯的化合物。高速逆流色谱的操作步骤包括：将正己烷：乙酸乙酯：水=4.8-5.2:4.8-5.2:9.8-10.2按对应的体积比配制两相溶剂，上相为固定相，下相加入22-28mmol/L羟丙基-β-环糊精作为流动相，从头端往高速逆流色谱仪中泵入固定相，待管路充分充满固定相后转动主机，同时泵入流动相，待管路出口处有明显流动相流出时，将TVN外消旋体溶于少量上相中注入样品池，同时开始采集数据，按峰接收目标成分。药效学试验结果表明，(R,R)-TVN可以显著降低蔗糖所致的小鼠高血糖，其效果比TVN外消旋体强。而它的对映异构体(S,S)-TVN不能显著降低蔗糖所致的小鼠高血糖。下面是部分药效学试验及结果：小鼠平均每只体重为22-25g。随机分为6组，每组动物10只。各组动物禁食12小时后灌胃给药。正常对照组：给予与阳性对照等体积的0.5%CMC-Na溶液；阴性对照组：给予与阳性对照等体积的0.5%CMC-Na溶液；阿卡波糖组：给予0.5%CMC-Na溶液配制成0.33mg/mL阿卡波糖的混悬液0.3mL/10g体重；TVN外消旋体组：给予0.5%CMC-Na溶液配制成0.33mg/ml的TVN外消旋体混悬液0.3ml/10g体重；(S,S)-TVN组：给予0.5%CMC-Na溶液配制成0.33mg/ml的(S,S)-TVN混悬液0.3ml/10g体重；(R,R)-TVN组：给予0.5%CMC-Na溶液配制成0.33mg/ml的(R,R)-TVN混悬液0.3ml/10g体重；30分钟后除正常组外各组动物灌胃给予6.7%蔗糖溶液0.3ml/10g体重，正常组动物灌胃给予等体积的水。分别于动物灌胃蔗糖溶液后0、0.5、1和2小时四个时间点眼眶采血，离心，取2μL血清，加入到96孔板中，再加入200μL葡萄糖试剂盒试剂，用505nm酶标仪测定吸光度值，通过标准曲线得到血糖浓度。如下表：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>“*”：P<0.05,“**”：P<0.01（相对于阴性对照组）绘制蔗糖耐量试验曲线，计算曲线下面积，见图1。所有数据均用均值±标准差（ntent="drawing" img-format="tif" inline="yes" orientation="portrait" wi="90"/>）表示。采用SPSS11.5软件进行分析,数据比较采用单因素方差分析。P﹤0.05表示有显著性差异，P﹤0.01表示有极显著性差异。在正常小鼠口服蔗糖耐量试验血糖水平的变化表中，通过SPSS11.5软件计算,阿卡波糖组、TVN外消旋体组在0.5小时的血糖降糖率与阴性对照组相比分别为18.97%和13.98%，且P<0.05，即有显著差异。它们在1小时的血糖降糖率与阴性对照组相比分别为21.66%和14.60%，即有显著差异。(R,R)-TVN组在0.5小时、1小时的血糖降糖率与阴性对照组相比分别为30.20%和22.79%，且P<0.01，即有极显著差异。(S,S)-TVN组在0.5小时、1小时的血糖降糖率与阴性对照组相比分别为0.08%和3.01%，几乎与阴性对照组无差别。在图1中，通过计算蔗糖耐量试验曲线下面积，研究实验整体水平上的糖耐量，与阴性对照组相比，TVN外消旋体组、(R,R)-TVN组以及阴性对照组糖耐量曲线下面积分别为18.3,16.7和21.0mmolxa0h/L,且P<0.01，即有极显著差异。(S,S)-TVN组糖耐量曲线下面积为20.9mmolxa0h/L，与阴性对照组几乎无差别。结论：(R,R)-TVN可以显著降低蔗糖所致的小鼠高血糖，而它的对映异构体(S,S)-TVN不能显著降低蔗糖所致的小鼠高血糖。并且它们的混合物TVN外消旋体的降血糖活性介于两者之间。附图说明：图1是各实验组糖耐量曲线下面积图。“*”：P<0.05,“**”：P<0.01（相对于阴性对照组）图2是TVN外消旋体高速逆流拆分图图3是TVN消旋体以及HSCCC各流份的HPLC图。图4是HSCCC两流份的CD图。
具体实施方式
实施例1高速逆流色谱分离TVN外消旋体：制备样品溶液：20mgxa0TVN外消旋体溶于10mL上相有机相中。1200mL两相溶剂系统：正己烷：乙酸乙酯：25mmol/L羟丙基-β-环糊精水溶液（5:5:10，体积比）置于2000mL分液漏斗中充分平衡一晚上，然后分液，超声30分钟。将上相溶剂作为固定相，以30mL/min的流速注满高速逆流色谱整个管路系统。转动主机使其转速保持在800转/分钟。打开柱温箱保持温度在5℃。以下相溶剂作为流动相，然后以1mL/min的流速向高速逆流管路中注入下相，当管路出口处有明显下相流出时，将样品溶液注入样品池。流份在313nm的紫外检测下收集，逆流图见图2，其中：1为(S,S)-TVN，2为(R,R)-TVN。收集到的样品中加入少量盐酸酸化，用乙酸乙酯萃取三次，然后真空浓缩得到粗品，再经过硅胶柱色谱，用二氯甲烷：甲醇（15:1，体积比）洗脱以除去少量的羟丙基-β-环糊精，得到高纯度的样品：8.2mg的(S,S)-TVN和9.4mg的(R,R)-TVN。回收率超过80%。(R,R)-TVN和(S,S)-TVN可通过以下方法得到验证：通过HPLC验证TVN外消旋体以及HSCCC两个流份，见图3。图3中(a)为TVN外消旋体；(b)HSCCC包含(S,S)-TVN的流份;(c)HSCCC包含(R,R)-TVN的流份.HPLC条件：Agilent1200HPLC配备Agilentxa0HPLC工作站，色谱柱为Agilentxa0Zorbaxxa0SB-C₁₈柱(4.6mm×250mm,5μm)，温度为30℃，流动相为：25mmolxa0L^-1HP-β-CD水溶液:乙腈(75:25,v/v)，流速：1.0mLmin^-1，检测波长为320nm。在图3中，(R,R)-TVN(t=21.493min)的保留时间比(S,S)-TVN(t=19.247min)的保留时间要长，同时两个化合物的纯度都超过98%，它们的对映体过量值(ee)值达到100%。图4为两个化合物的圆二色谱图(CD)，两者在浓度相同的情况下，其CD曲线几乎是完全对称的。其中虚线：HSCCC包含(S,S)-TVN流份的CD图；实线：HSCCC包含(R,R)-TVN流份的CD图；浓度均为0.2mg/ml。